中山大學碩士學位論文2006年作者朱建銘
論文摘要：
本文通過小鼠急性腦缺氧實驗、大鼠大腦中動脈栓線法局灶性腦缺血 (MCAO)損傷模型、對腦血流量影響實驗、抑制血小板聚集及血栓形成實驗、小鼠不完全腦缺血模型、沙土鼠全腦缺血再灌注損傷等實驗和模型，分別從擴張腦血管、抑制血小板聚集及血栓形成、抗水腫、抗缺血再灌注損傷、抗自由基和興奮性氨基酸損傷等角度，系統的研究了原人參三醇皂苷 ( PPT )對缺血性腦中風的防治作用及其機制。
方法
- 小鼠急性腦缺氧實驗小鼠ip給藥，每天一次，共3次，末次給藥後30min將小鼠逐只斷頭，立即按秒錶記錄小鼠斷頭後至張口喘氣停止時間作為耐缺氧指標。
- 大鼠大腦中動脈栓線法局灶性腦缺血 (MCAO)損傷模型雄性SD大鼠，ip預防給藥兩次，每天一次，造模前O.5h iv給藥1次，造模後4h和10h ip給藥兩次。模型建立：分離、結紮右側頸總動脈，參照Berdson法用4-0尼龍線阻斷大腦中動脈。造模成功能夠存活24h的大鼠確定為最後實驗對象，並進行行為學評分後，快速取右腦，並切成三片，將腦前部用於腦含水量測定，中部用於腦梗死面積測定，後部用於病理組織學檢查。
- 對腦血流量影響實驗犬靜脈滴注給藥，分別在給藥前和給藥後5、10、15、30、60、120以及180min測定平均動脈血壓(MAP)、心率(HR)、腦血流量(CBF)和腦血管阻力(CVR)等指標。
- 抑制血小板聚集及血栓形成實驗抑制血小板聚集：大鼠ip給藥，共3次，每天1次。於末次給藥30min後，分別自頸總動脈放血，在血樣中加入5μl已稀釋的ADP(終濃度為50μmol／L)反應5min後測定最大聚集度。抑制血栓形成：大鼠經4％戊巴比妥鈉ip麻醉，舌下靜脈給藥後20min，分離右側頸總動脈和左側頸外靜脈。把插入絲線的聚乙烯管的兩端分別插入右側頸總動脈和左側頸外靜脈，打開動脈夾開放血液15min後，中斷血流，迅速取出聚乙烯管中的血栓，在分析天平上稱重，求出血栓抑制率。
- 雙側頸總動脈結紮的不完全腦缺血模型給小鼠ip給藥，共3次，每天1次；於末次給藥後30min，麻醉後分離雙側頸總動脈，各組經尾靜脈注射1％伊文思藍溶液，並分別在註射10min後結紮雙側頸總動脈。在結紮3h後斷頭取出腦組織，稱重後測腦組織內伊文思藍含量併計算腦指數。
- 沙土鼠全腦缺血再灌注損傷模型採用結紮沙土鼠雙側頸總動脈15min再灌注24h製備全腦缺血再灌注損傷模型，動物隨機分成假手術組、模型組、PPT 30mg／kg組、PPT 60mg／kg組、PPT 120mg／kg組和陽性對照藥血栓通注射液組。觀察造模24h後PTS對沙土鼠腦組織超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、興奮性氨基酸及病理組織學的影響。
結果
- 小鼠急性腦缺氧實驗結果提示，PPT注射液30mg／kg以上劑量組給藥後均能顯著延長小鼠斷頭喘息時間，提示PTS注射液可提高小鼠腦耐急性缺氧的能力以增強對抗腦中風的能力。
- 大鼠大腦中動脈栓線法局灶性腦缺血 (MCAO)損傷模型實驗提示：一定劑量的PPT注射液能改善MCAO大鼠的偏癱體徵，縮小腦內梗死面積，減輕腦水腫和神經元細胞的繼發性損害，對MCAO大鼠具有良好的防治作用。
- 腦血流量實驗表明：12.3mg／kg、24.6mg／kg和49.6mg／kg劑量的PPT注射液在給藥後30分鐘內均能明顯降低犬腦血管阻力，使腦血流量顯著增加，而對血壓無明顯影響，對心率影響也不明顯，機制可能與擴張腦血管有關。
- 抑制血小板聚集及血栓形成實驗提示，41.54 mg／kg和83.08mg／kg劑量的PPT注射液對ADP誘導的大鼠血小板聚集有明顯的抑製作用，且隨著劑量的增大抑製作用逐漸增強；抗血栓形成實驗提示，PPT注射液各劑量組能明顯抑制大鼠血栓形成。
- 小鼠雙側頸總動脈結紮不完全腦缺血模型實驗表明：與模型組比較，PPT注射液各組腦指數和腦伊文思藍含量顯著降低，提示一定劑量的PTS注射液可以抑制小鼠腦缺血引起的腦血管通透性增加，從而降低腦指數，減輕腦水腫。
- PPT對沙土鼠全腦缺血再灌注損傷的保護作用組織病 理學檢查表明，同模型組比較，PPT中、高劑量組對沙土鼠腦缺血再灌注致腦組織和神經細胞的病理損傷有較好的改善作用。腦缺血再灌注24小時後沙土鼠腦組織SOD活性明顯降低，MDA含量明顯提高，與假手術相比較均有顯著性差異。PPT給藥組的SOD活性與與模型組相比顯著升高，MDA含量與模型組相比顯著降低，提示PPT對沙土鼠全腦缺血再灌腦組織的自由基損傷有明顯保護作用。造模後模型組G1u和Asp明顯升高，PTS各組升高值明顯低於模型組，提示PPTS可抑制興奮性氨基酸的釋放，保護腦神經細胞。
結論綜合以上分析，結果提示一定劑量的PPTS對缺血性腦中風有明顯的防治作用，其作用機制可能是擴張腦血管、抑制血小板聚集及血栓形成、減輕腦水腫以恢復腦血流的供應，以及抵抗自由基和興奮性氨基酸損傷以保護腦神經細胞。
